• 1、產(chǎn)品回收率計(jì)算公式
• 2、回收率異常的原因
• 3、蛋白質(zhì)中的含氮量是如何測(cè)定的一般認(rèn)為蛋白質(zhì)中的平均含氮量為16%,于是含氮量=蛋白質(zhì)量*16%,蛋白質(zhì)量=含氮量/16%=含氮量*6.25 氨基酸脫水縮合后剩余物的相對(duì)分子質(zhì)量是其含氮量的6.25倍(約

1、產(chǎn)品回收率計(jì)算公式

?產(chǎn)品回收率計(jì)算公式：

2、回收率異常的原因

說(shuō)明質(zhì)量有問(wèn)題，質(zhì)量一旦出現(xiàn)問(wèn)題，大家都就投訴回收回收率就比較高。

3、蛋白質(zhì)中的含氮量是如何測(cè)定的一般認(rèn)為蛋白質(zhì)中的平均含氮量為16%,于是含氮量=蛋白質(zhì)量*16%,蛋白質(zhì)量=含氮量/16%=含氮量*6.25 氨基酸脫水縮合后剩余物的相對(duì)分子質(zhì)量是其含氮量的6.25倍(約

這是最經(jīng)典的方法了——微量凱氏法
一、原理
植物組織中的有機(jī)氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮.非蛋白氮主要是氨基酸和酰胺,以及少量無(wú)機(jī)氮化物,是可溶于三氯乙酸溶液的小分子.可加入三氯乙酸,使其最終濃度為5％,將蛋白質(zhì)沉淀出來(lái),分別測(cè)定總氮、蛋白氮或非蛋白氮；通常只測(cè)定總氮或蛋白氮.將植物材料與濃硫酸共熱,硫酸分解為二氧化硫、水和原子態(tài)氧,并將有機(jī)物氧化分解成二氧化碳和水；而其中的氮轉(zhuǎn)變成氨,并進(jìn)一步生成硫酸銨.為了加速有機(jī)物質(zhì)的分解,在消化時(shí)通常加入多種催化劑,如硫酸銅、硫酸鉀和硒粉等.消化完成后,加入過(guò)量NaOH,將NH4+轉(zhuǎn)變成NH3,通過(guò)蒸餾把NH3導(dǎo)入過(guò)量的硼酸溶液中,再用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定,直到硼酸溶液恢復(fù)原來(lái)的氫離子濃度.滴定消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸摩爾數(shù)即為NH3的摩爾數(shù),通過(guò)計(jì)算,可得出含氮量.
蛋白質(zhì)是一類(lèi)復(fù)雜的含氮化合物,每種蛋白質(zhì)都有其恒定的含氮量,（約在14％～18％,平均約含氮16％）所以,可用蛋白氮的量乘以6.25（100／16＝6.25）,算出蛋白質(zhì)的含量.若以總氮含量乘以6.25,就是樣品的粗蛋白含量.試樣中若含有硝態(tài)氮時(shí),首先要使硝態(tài)氮還原為銨態(tài)氮,可加入水楊酸和硫代硫酸鈉,使硝態(tài)氮與水楊酸在室溫下作用生成硝基水楊酸,再用硫代硫酸鈉粉使硝基水楊酸轉(zhuǎn)化為銨鹽.由于水楊酸與硫代硫酸鈉會(huì)消耗一部分硫酸,所以消化時(shí)的硫酸用量要酌情增加.
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
（一）材料：各種干燥、過(guò)篩（60～80目）的植物樣品
（二）儀器設(shè)備：1.消化管；2.微量凱氏定氮蒸餾裝置一套（圖17）；3.三角燒瓶；4.微量滴定管；5.量筒；6.容量瓶；7.燒杯；8.移液管等.
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）樣品提取分離：準(zhǔn)確稱(chēng)取烘至恒重的樣品0.1000g～0.5000g（依樣品含氮量而定,含氮1～3mg宜）,置10ml離心管中,加入5ml5％三氯乙酸,90℃水浴中浸提15min,不時(shí)攪拌,取出后用少量蒸餾水沖洗玻棒,待溶液冷卻后,4000rpm離心15min,上清液棄去.并用5％三氯乙酸洗沉淀2～3次,離心,棄去上清液,最后用蒸餾水將沉淀無(wú)損地洗入鋪有濾紙的漏斗上,去掉濾液后,將沉淀和濾紙?jiān)?0℃下烘干,用于蛋白氮的測(cè)定.
（二）樣品的消化：取4支消化管編號(hào).1號(hào)管直接放入稱(chēng)好的材料用于測(cè)定總氮,2號(hào)管放入上述烘干的濾紙和沉淀,用于蛋白氮的測(cè)定,3號(hào)管放入同樣濾紙一張、4號(hào)管不加任何樣品作為空白對(duì)照,注意將樣品放入消化管底部.向各消化管加濃硫酸5ml,混合催化劑0.3g～0.5g,將樣品浸泡數(shù)h或放置過(guò)夜后,在管口蓋一小漏斗,放在遠(yuǎn)紅外消煮爐上加熱消化.開(kāi)始時(shí)溫度可稍低,以防止內(nèi)容物上升至管口.泡沫多時(shí),可從小漏斗加入2～3滴無(wú)水乙醇.到管口出現(xiàn)白色霧狀物時(shí),泡沫已不再產(chǎn)生；此時(shí)可逐漸升溫,使內(nèi)容物達(dá)到微沸.直到消化液變?yōu)榍宄和该鳛橹?消化過(guò)程中,若在消化管上部發(fā)現(xiàn)有黑色顆粒時(shí),應(yīng)小心地轉(zhuǎn)動(dòng)消化管,用消化液將它沖洗下來(lái),以保證樣品消化完全.消化過(guò)程約需2～3h.
（三）定容消化完畢待溶液冷卻后,沿管壁仔細(xì)加入10ml左右無(wú)氨蒸餾水,以沖洗管壁,再將消化液小心轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中.以無(wú)氨水少量多次沖洗消化管,洗滌液并入容量瓶.冷卻后用無(wú)氨水定容至刻度,混勻備用.
（四）蒸餾及滴定 以下幾步進(jìn)行：
1.儀器的洗滌：先經(jīng)一般洗滌后,還要用水蒸氣洗滌.可按下列方法進(jìn)行蒸氣洗滌.先在蒸氣發(fā)生器中加入2／3體積的蒸餾水（事先加入幾滴濃硫酸,使其酸化,加入甲基紅指示劑,并加入少許沸石或毛細(xì)玻璃管以防止爆沸）.打開(kāi)漏斗下的夾子,用電爐或酒精爐加熱至沸騰,使水蒸氣通入儀器的各個(gè)部分,以達(dá)到清洗的目的.在冷凝管下端放置一個(gè)三角瓶接收冷凝水.然后關(guān)緊漏斗下的夾子,繼續(xù)用蒸氣洗滌5min.沖洗完畢,夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,蒸餾瓶中的廢液由于減壓而倒吸進(jìn)入收集器,打開(kāi)收集器下端的活塞排除廢液.如此清洗2～3次,再在冷凝管下端換放一個(gè)盛有硼酸－指示劑混合液的三角瓶,使冷凝管下口完全浸沒(méi)在液面以下0.5cm處,蒸餾1～2min,觀察三瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色.如不變色,表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈.移去三角瓶,再蒸餾1～2min,用蒸餾水沖洗冷凝管下口,關(guān)閉電爐,儀器即可供測(cè)定樣品使用.
2.標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨測(cè)定為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術(shù),并檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,找出系統(tǒng)誤差,常用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨測(cè)試三次.在三角瓶中加入20ml硼酸－指示劑混合液,將此三角瓶承接在冷凝管下端,并使冷凝管的出口浸入溶液中.注意在加樣前務(wù)必打開(kāi)收集器活塞,以免三角瓶?jī)?nèi)液體倒吸.準(zhǔn)確吸取2ml硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液,加到漏斗中.
四、結(jié)果計(jì)算
樣品中總氮量（％）＝0.010×（V3—V0）×100×14/（W×1000×10）×100×氮的回收率
樣品中蛋白氮含量（％）＝0.0100×（V1－V2－V0）×100×14/（W×5×1000）×100×氮的回收率
回收率（％）＝0.0100×（V－V0）×14/（2.0×0.6×100）×100

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